Optimización de una técnica de PCR convencional para la amplificación de la región LCR y el gen E6 del virus del papiloma humano tipo 16

Autores/as

  • Natalia Jazmín Díaz-Ferreira Universidad Nacional de Asunción, Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud, Departamento de Salud Pública. San Lorenzo, Paraguay https://orcid.org/0000-0001-5690-2167
  • Mabel Rocío Miranda-Echagüe Universidad Nacional de Asunción, Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud, Departamento de Salud Pública. San Lorenzo, Paraguay https://orcid.org/0000-0003-2914-3112
  • María Alexandra Mercado Amarilla Universidad Nacional de Asunción, Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud, Departamento de Salud Pública. San Lorenzo, Paraguay https://orcid.org/0000-0003-1958-2939
  • Iara Magaly Martínez Pereira Universidad Nacional de Asunción, Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud, Departamento de Biología Molecular y Biotecnología. San Lorenzo, Paraguay https://orcid.org/0000-0003-2877-2363
  • Adriana Beatriz Valenzuela Cáceres Universidad Nacional de Asunción, Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud, Departamento de Salud Pública. San Lorenzo, Paraguay https://orcid.org/0000-0002-0785-8371
  • Laura Patricia Mendoza Torres Universidad Nacional de Asunción, Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud, Departamento de Salud Pública. San Lorenzo, Paraguay https://orcid.org/0000-0001-6124-1244
  • Pamela Esther Mongelós Dacunte Universidad Nacional de Asunción, Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud, Departamento de Salud Pública. San Lorenzo, Paraguay https://orcid.org/0000-0002-7771-3688

DOI:

https://doi.org/10.18004/mem.iics/1812-9528/2022.020.02.13

Palabras clave:

VPH16, PCR, LCR/E6

Resumen

El cáncer de cuello uterino es el cuarto cáncer más frecuente en mujeres en el mundo y a nivel mundial, el VPH 16 se encuentra presente en aproximadamente el 60% de los casos. A la fecha, las variantes de VPH 16 se clasifican en 4 linajes y 16 sublinajes asociándose algunas variantes con severidad de lesión. La secuenciación de la región LCR y del gen E6 es utilizada para la clasificación de variantes. Por ello, el objetivo fue optimizar 2 PCRs convencionales para detectar la región LCR y una PCR para el gen E6. Para ello, se utilizaron muestras positivas para VPH 16, cebadores específicos para la región LCR y el gen E6. Se probaron las reacciones a diferentes temperaturas de anillamientos. La concentración de MgCl2, dNTP y cebadores fueron determinadas siguiendo las recomendaciones del fabricante de la enzima ADN polimerasa utilizada. Para la amplificación de la región LCR y el gen E6 del VPH 16, se observaron mejores resultados a una temperatura de anillamiento de 57°C y 50°C, respectivamente. La concentración de MgCl2 utilizada en ambas reacciones fue de 1,5mM, la de dNTP 0,2mM y la de cebadores 0,2uM. La optimización de la reacción de PCR permitirá obtener amplicones aptos para secuenciación, a fin de determinar las variantes génicas y posteriormente evaluar funcionalidad y actividad transcripcional que puedan estar relacionadas con la patogénesis cervical.

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Citas

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Publicado

2022-08-01

Cómo citar

Díaz-Ferreira, N. J., Miranda-Echagüe, M. R., Mercado Amarilla, M. A., Martínez Pereira, I. M., Valenzuela Cáceres, A. B., Mendoza Torres, L. P., & Mongelós Dacunte, P. E. (2022). Optimización de una técnica de PCR convencional para la amplificación de la región LCR y el gen E6 del virus del papiloma humano tipo 16. Memorias Del Instituto De Investigaciones En Ciencias De La Salud, 20(2), 13–19. https://doi.org/10.18004/mem.iics/1812-9528/2022.020.02.13

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