PCR múltiple para la detección simultánea de los genes mecA y pvl en Staphylococcus spp

Autores/as

  • María Leticia Carpinelli Acevedo IICS-UNA
  • Rosa María Guillén Fretes IICS-UNA
  • Norma Fariña IICS-UNA
  • W Basualdo Hospital General Pediátrico Niños de Acosta Ñú. Ministerio de Salud Pública y Bienestar Social.
  • R Aquino Hospital General Pediátrico Niños de Acosta Ñú. Ministerio de Salud Pública y Bienestar Social.

Palabras clave:

Staphylococcus aureus, Estafilococos coagulasa negativos, meticilino resistencia, gen mecA, gen pvl

Resumen

Este estudio observacional descriptivo de corte transverso tuvo por objetivo estandarizar una PCR múltiple para la detección simultánea de los genes mecA y pvl en Staphylococcus spp. Se emplearon como cepas control: S. aureus ATCC 25923, S. aureus ATCC 43300 y un aislado de S. aureus portador de los genes mecA y pvl. La extracción de ADN se realizó por el método de ebullición. El límite de detección se estableció por medio de diluciones seriadas de ADN. Se determinó la aplicabilidad de la PCR múltiple testando 41 aislados de S. aureus y 51 Estafilococos coagulasa negativo (ECN) previamente caracterizados por métodos fenotípicos en noviembre del año 2009. Los productos de PCR fueron visualizados por electroforesis en gel de agarosa al 2% previa tinción con bromuro de etidio. Los productos de amplificación de la PCR múltiple presentaron tamaño esperado de 533pb y 433pb para los genes mecA y pvl respectivamente, con límites de detección de hasta 0,5 ng/μL. El gen mecA se detectó en 13 (31,7%) aislados de S. aureus y en 29 (56,7%) ECN. El gen pvl se detectó en 2 (4,9%) S. aureus y no fue detectado en ECN. La presencia del gen mecA tuvo 100% de concordancia con los métodos fenotípicos. Esta técnica es una herramienta útil en la confirmación de cepas de Estafilococos meticilino resistentes e identificación del gen pvl, además de ser relativamente sencilla con la ventaja de detectar ambos genes en una sola reacción.

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Citas

Velázquez-Meza ME. Surgimiento y diseminación de Staphylococcus aureus meticilinorresistente. Salud Publica Méx 2005;47(5):381-7.

Ardanuy C, Cercenado E, Morosi M, Torres C. Detección Fenotípica de Mecanismos de Resistencia en Grampositivos. Procedimientos en Microbiología Clínica. Recomendaciones de la Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. Madrid : La Sociedad; 2011.

Kilic A, Li H, Stratton CW, Tang Y. Antimicrobial susceptibility patterns and staphylococcal cassette chromosome mec types of, as well as Panton-Valentine leukocidin occurrence among, methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolates from children and adults in middle Tennessee. J Clin Microbiol 2006; 44(12):4436-40.

Gardam MA. Is methicillin-resistant Staphylococcus aureus an emerging community pathogen? A review of the literature. Can J Infect Dis 2000; 11(4):202-211.

Köck R, Becker K, Cookson B, van Gemert-Pijnen JE, Harbarth S, Kluytmans J, et al. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA): burden of disease and control challenges in Europe. Euro Surveill 2010;15(41):19688.

Gardella N, Picaso R, Predari SC, Lasala M, Foccoli M, Benchetrit GB, et al. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains in Buenos Aires Teaching Hospitals: replacement of the multidrug resistant South American clone by another susceptible to rifampin, minocycline and trimethoprim-sulfamethoxazole. Rev Argent Microbiol 2005;37:156-60.

Sola C, Saka HA, Vindel A, Bocco JL. Córdoba Staphylococcus aureus Collaborative Study Group. High frecuency of Panton-Valentine leukocidin genes in invasive methicillin-susceptible Staphylococcus aureus strains and the relationship with methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Córdoba Argentina. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2007; 26:281-6.

Malachowa N, DeLeo FR. Mobile genetic elements of Staphylococcus aureus. Cell Mol Life Sci 2010; 67(18):3057-71.

SCCmec English Home Page (Internet). USA: Department of Bacteriology, School of Medicine, Juntendo University. (cited 3 de diciembre de 2010). Disponible en: http://www.staphylococcus.net/

Gordon RJ, Lowy FD. Pathogenesis of methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection. Clin Infect Dis 2008 Jun 1;46 (Suppl 5):S350-9.

Boyle-Vavra S, Daum RS. Community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus: the role of Panton-Valentine leukocidin. Lab Invest. 2006 Dic 4;87(1):3-9.

Soloaga R, Corso A, Gagetti P, Faccone D, Galas M. Detección de meticilino-resistencia en Staphylococcus aureus: Comparación de métodos convencionales y aglutinación con MRSA-Screen latex. Rev Argent Microbiol 2004;36(1):36-40.

Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility testing; nineteenth informational supplement. 2009, Ene;29(3):M02-M07.

OPS. Informe anual de la Red de Monitoreo/Vigilancia de la Resistencia a los Antibióticos. 2008. (monografia en Internet). Washington: OPS-USAID; 2008. (citado 3 de diciembre 2010). Disponible en: http://www.lachealthsys.org/index.php?option=com_ content&task= view&id=367&.

Itemid=450.

Winn WN, Allen SD, Janda WM, Koneman EW, Procop GW, et al. Koneman-Diagnóstico microbiológico: texto y atlas en color. 6º ed. Buenos Aires: Médica Panamericana; 2008.

De Paulis AN, Predari SC, Chazarreta CD, Santoianni JE. Five test simple scheme for species level identification of clinical significant coagulase-negative staphylococci. J Clin Microbiol 2003; 41:1219-24.

Zhang K, Sparling J, Chow BL, Elsayed S, Hussain Z, Church DL, et al. New quadriplex PCR assay for detection of methicillin and mupirocin resistance and simultaneous discrimination of Staphylococcus aureus from coagulase-negative staphylococci. J Clin Microbiol 2004 Nov; 42(11):4947-55.

Murakami K, Minamide W, Wada K, Nakamura E, Teraoka H, Watanabe S. Identification of methicillin-resistant strains of staphylococci by polymerase chain reaction. J Clin Microbiol 1991 Oct; 29(10):2240-44.

Lina G, Piémont Y, Godail-Gamot F, Bes M, Peter MO, Gauduchon V, et al. Involvement of Panton-Valentine leukocidin-producing Staphylococcus aureus in primary skin infections and pneumonia. Clin Infect Dis 1999 Nov; 29(5):1128-32.

Kolman S, Arielly H, Paitan Y. Evaluation of a Single and double-locu real-time PCR assays for methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) surveillance. BMC Res Notes (revista en Internet) 2010 (citado 10 de noviembre de 2011); 3:110. Disponible en: http://www.biomedcentral.com/1756-0500/3/110.

DeBuyser ML, Morvan A, Grimont F, ElSolh N. Characterization of Staphylococcus Species by Ribosomal RNA Gene Restriction Patterns. J Gen Microbiol 1989 Apr;135(4):989-99.

Oliveira D, DeLancastre H. Multiplex PCR Strategy for Rapid Identification of Structural Types and Variants of the mec Element in Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemother 2002; 46(7):2155-61.

Pérez-Roth E, Claverie-Martín F, Villar J, Méndez-Alvarez S. Multiplex PCR for Simultaneous Identification of Staphylococcus aureus and Detection of Methicillin and Mupirocin Resistance. J Clin Microbiol 2001 39(11): 4037-41.

McClure J, Conly JM, Lau V, Elsayed S, Louie T, Hutchins W, et al. Novel multiplex PCR assay for detection of the staphylococcal virulence marker Panton-Valentine leukocidin genes and simultaneous discrimination of methicillin-susceptible from -resistant staphylococci. J Clin Microbiol 2006 Mar;44(3):1141-4.

Brakstad OG, Aasbakk K, Maeland JA. Detection of Staphylococcus aureus by polymerase chain reaction amplification of the nuc gene. J Clin Microbiol 1992 30:1654-60.

Shopsin B, Gomez M, Waddington M, Riehman M, Kreiswirth. Use of coagulase gene (coa) repeat region nucleotide sequences for typing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains. J Clin Microbiol 2000 38:3453-6.

Mimica MJ, Berezin EN, Carvalho RLB, Mimica IM, Mimica LMJ, Sáfadi MAP, et al. Detection of methicillin resistance in Staphylococcus aureus isolated from pediatric patients: is the cefoxitin disk diffusion test accurate enough? Braz J Infect Dis 2007 Ago;11(4):415-7.

Al-Talib H, Hasan H, Yean C, Al-Ashwal SN, Ravichandran M. Fatal Necrotizing Pneumonia Caused by Panton-Valentine Leucocidin-Producing Hospital-Acquired Staphylococcus aureus: a Case Report Jpn. J Infect Dis 2011 64(1):58-60.

Brady JM, Stemper ME, Weigel A, Chyou P, Reed KD, Shukla SK. Sporadic "transitional" community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains from health care facilities in the United States. J Clin Microbiol 2007 Ago;45(8):2654-61.

Palombarani S, Gardella N, Tuduri A, Figueroa S, Sly G, Corazza R, et al. Community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections in a hospital for acute diseases. Rev Argent Microbiol 2007 Sep;39(3):151-5.

Gauduchon V, Werner S, Prévost G, Monteil H, Colin DA. Flow Cytometric Determination of Panton-Valentine Leucocidin S Component Binding. Infect Immun 2001; 69(4): 2390-5.

Blanco R, Ezpeleta G, Cisterna R. Rapid real-time SYBRGreen assay for Panton Valentine leukocidin detection in staphylococcal infections. 5th European Meeting on Molecular Diagnostics, Scheveningen, Netherlands. 2007.

Badiou C, Dumitrescu O, George N, Forbes ARN, Drougka E, Chan KS, et al. Rapid Detection of Staphylococcus aureus Panton-Valentine Leukocidin in Clinical Specimens by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay and Immunochromatographic Tests. J Clin Microbiol 2010 Abr 1;48(4):1384-90.

Shore AC, Deasy EC, Slickers P, Brennan G, O'Connell B, Monecke S, et al. Detection of Staphylococcal Cassette Chromosome mec Type XI Carrying Highly Divergent mecA, mecI, mecR1, blaZ, and ccr Genes in Human Clinical Isolates of Clonal Complex 130 Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemother 2011 Ago;55(8):3765-73.

García-Álvarez L, Holden MT, Lindsay H, Webb CR, Brown DF, Curran MD, et al. Meticillin-resistant Staphylococcus aureus with a novel mecA homologue in human and bovine populations in the UK and Denmark: a descriptive study. Lancet Infect Dis (revista en Internet) 2011 (citado 10 de Julio de 2011); 11(8):595-603. Disponible en: http://www.thelancet.com/journals/laninf/article/ PIIS1473-3099%2811%2970126-8/fulltext.

Guillén R, Basualdo W, Castro H, Campuzano A, Macchi M, Ortellado J, et al. Staphylococcus aureus adquiridos en la comunidad: Caracterización clínica, fenotípica y genotípica de aislados en niños que concurren a hospitales de referencia de Asunción y Dpto. central. Resumen 167. Rev Inst Med Trop 2011 Nov;6(supl):44.

Kaiser T, Pacheco F, Avelino A, Pereira E, Netto K, Ferreira A. Avaliação de métodos comumente usados em laboratórios para a determinação da suscetibilidade à oxacilina entre amostras de Staphylococcus sp, isoladas de um hospital de Vitória, Estado do Espírito Santo. Rev. Soc. Bras. Med. Trop 2010;43(3):298-303.

Batista N, Gutierrez I, Lara M, Laich F, Méndez S. Evaluación del método de difusión en disco de 30μg de cefoxitina en la detección de resistencia a meticilina en aislamientos seleccionados de Staphylococcus aureus. Rev Esp Quimioter 2008;21(4):213-6.

Fariña N, Carpinelli L, Samudio M, Guillén R, Laspina F, Sanabria R, et al. Estafilococos Coagulasa Negativos Clínicamente Significativos. Especies más frecuentes y Factores de Virulencia. Resumen 091. Rev Inst Med Trop 2011 Nov;6(supl):28.

Souza A, Secchi C, Reiter K, Rodrigues L, Peixoto A, Alves P. Evaluation of oxacillin and cefoxitin disks for detection of resistance in coagulase negative staphylococci. Mem Inst Oswaldo Cruz 2007; 102(6):719-23.

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Publicado

2012-06-01

Cómo citar

Carpinelli Acevedo, M. L. ., Guillén Fretes, R. M. ., Fariña, N. ., Basualdo, W., & Aquino, R. (2012). PCR múltiple para la detección simultánea de los genes mecA y pvl en Staphylococcus spp. Memorias Del Instituto De Investigaciones En Ciencias De La Salud, 10(1). Recuperado a partir de https://revistascientificas.una.py/index.php/RIIC/article/view/1701

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