Introducción
Los hemoparásitos
son parásitos microscópicos que viven y se reproducen a nivel de vasos
sanguíneos, por fuera o dentro de glóbulos rojos o blancos. Estos
microorganismos se encuentran ampliamente distribuidos en todo el mundo, al
igual que las garrapatas, causando efectos negativos en la salud de los
animales, que se caracterizan especialmente por decaimiento y cuadros hemáticos
como anemia y trombocitopenia. La mayoría de los casos clínicos severos se
observan en periodos de alta incidencia de garrapatas, que son los principales
vectores de los agentes causales de los hemoparásitos (Domínguez Álvarez,
2011).
Los Ixódidos
o garrapatas duras son importantes vectores de enfermedades producidas por
protozoos, bacterias, virus y rickettsias, son parásitos temporales y se localizan
en el hospedador durante cortos periodos de tiempo (Urquhart et al., 2001). Comprenden
unas 700 especies en 12 géneros: Boophilus, Rhipicephalus, Dermacentor,
Amblyoma, Hyalomina, Haemaphysalis, Ixodes, Anocentor,
Margaropus, Aponomina y Rhipicentor; son cosmopolitas,
encontrándose presentes en todas las latitudes, pero especialmente en climas
tropicales y subtropicales, la mayoría de las especies son vectores de
microorganismos causantes de patologías de gran prevalencia e incidencia en diferentes
geografías y a gran variedad de vertebrados (León-Clavijo
y Hernández Rojas, 2012).
Respecto
a la morfología de los Ixódidos, está caracterizada por presentar un cuerpo
aplanado que mide entre 1 a 10 mm, alcanzando tamaños mayores cuando se ingurgitan
de sangre adquiriendo pesos superiores a 250 mg. El cuerpo de estas garrapatas
posee un escudo que cubre toda la superficie dorsal del macho, es decir es
completo, mientras que en las hembras este es incompleto, solo llega a cubrir
el tercio anterior, permitiendo así que el abdomen crezca y se agrande lo
suficiente para contener hasta dos centímetros cúbicos de sangre (León-Clavijo y
Hernández-Rojas, 2012).
Durante
la perforación de la piel, los quelíceros y el hipostoma desgarran los vasos
capilares provocando una hemorragia. Al mismo tiempo, las garrapatas inoculan
la saliva, cuyas moléculas líticas cooperan con la respuesta inflamatoria e
inmunitaria del hospedador para formar un pequeño absceso o cavidad de
alimentación en el extremo de los apéndices bucales, desde el cual succionan la
sangre y los exudados tisulares que fluyen hacia dicha cavidad. Las garrapatas
inoculan la saliva y succionan la sangre a través del mismo canal, de manera
que realizan ambas funciones alternativamente durante todo el tiempo que tardan
en completar la toma de sangre (Manzano Román et al., 2016).
Las
garrapatas durante su vida pasan a través de cuatro fases: huevos, larvas,
ninfas y adultos. Los tres últimos estadios se caracterizan por ser estados
activos del ciclo, en los cuales estos ectoparásitos se alimentan de sangre una
vez en cada una de las fases, pudiendo permanecer durante mucho tiempo en los
pastos (León-Clavijo y Hernández-Rojas, 2012).
Las
hembras de los ixodios chupan sangre una sola vez. Cuando están repletas se
desprenden del huésped, caen al suelo, ponen varios miles de huevos y mueren.
Las larvas se suben a las hierbas o arbustos donde esperan el paso de algún
hospedador adecuado (Junquera, 2021).
La
distribución de la erliquiosis canina está relacionada con la distribución de
las garrapatas vectores, Rhipicephalus sanguineous, la garrapata
marrón del perro y vector de Ehrlichia canis en todo el mundo, es
probable que otras especies de garrapatas transmitan Ehrlichia conocidas
y aun por conocer a animales silvestres y domésticos. Debido a las infecciones
crónicas y subclínicas, un perro puede ser trasportado de una región endémica a
otra no endémica y desarrollar posteriormente las manifestaciones de la
enfermedad, años después de la infección inicial (Ettinger y Feldman, 2007).
La
Anaplasmosis canina se ha denominado una enfermedad de infecciones bacterianas
transmitidas por garrapatas duras (Ixodidae), que afecta al ser humano y a los
animales. Son de distribución universal, y están provocadas por diferentes
especies de los géneros Anaplasma de la familia Anaplasmataceae (Domínguez Álvarez, 2011).
La Babesia
spp. es un protozoario que parasita los glóbulos rojos. Luego de la infección,
el periodo de incubación varía de 10 días a 3 semanas. La parasitemia puede
detectarse en forma transitoria desde el día 1; la parasitemia recurrente se
detecta hacia el día 14, con un máximo en el número de organismos hacia el día
20 (Couto y Nelson, 2000).
Las
enfermedades infecciosas están despertando atención especial en los últimos
años en la Medicina Veterinaria, debido a diferentes causas, entre las que se
mencionan: la aparición o detección de nuevos agentes patógenos transmitidos
por garrapatas que anteriormente no se les daba mucha importancia; al hecho de
que agentes infecciosos descritos en otras zonas ahora son descubiertos en
lugares muy diversos y distantes (debido al cambio climático y a los
movimientos migratorios de los propietarios y sus mascotas); al incremento en
el número de casos en los que se diagnostican múltiples coinfecciones en el
mismo perro y al uso de nuevas técnicas de diagnóstico de alta sensibilidad que
permiten identificar agentes infecciosos que hasta ahora, con los métodos
tradicionales, no era posible. El diagnóstico de los agentes causales de las
hemoparasitosis debe ser seguro y definitivo, de manera que permita instaurar
la terapéutica específica, garantizando la eficacia en el tratamiento y
consecuentemente disminución de la mortalidad (Domínguez Álvarez, 2011).
Esto
representa una gran pérdida no solo económica sino sentimental, ya que estos
seres forman parte de nuestras vidas, están en constante contacto con nosotros
y si no tenemos el conocimiento pleno de qué enfermedades pueden acometerlos, a
qué riesgos están expuestos en nuestro entorno no sabremos cómo actuar para
protegerlos. El riesgo de que nuestra mascota en su tiempo de vida pueda
padecer de una o varias de estas enfermedades es alto. El conocimiento sería la
única opción que nos llevaría a hacer un buen plan de prevención y cuidado,
garantizar la salud y bienestar de nuestros caninos (Márquez Cabrera, 2011).
Desde
el punto de vista de la salud pública, las garrapatas son una fuente de
transmisión de enfermedades zoonóticas que pueden llegar a causar innumerables
daños al ser humano, de allí su importancia en el control de los mismos para
evitar la aparición de brotes y generar incertidumbre en la sociedad.
El objetivo del trabajo fue
la identificación de Rickettsias sp. y hemoparásitos en garrapatas de la
especie Rhipicephalus sanguineus recolectadas de perros en la
ciudad de San Juan Bautista, departamento de Misiones. Para tal se propuso,
estimar porcentualmente las Rickettsias sp. y hemoparásitos en
garrapatas y analizar los resultados obtenidos. La investigación no solo
proporcionará información crucial, sino que también abrirá nuevas oportunidades
para dar continuidad a este estudio o explorar otras investigaciones vinculadas
al mismo tema.
Materiales
y métodos
Fueron
analizadas 62 garrapatas adultas cargadas de sangre oriundas de 62 caninos sin
distinción de edad, raza y sexo, entre los meses de septiembre del 2016 hasta
el mes de enero del año 2017.
El
muestreo se llevó a cabo en el barrio Concepción (zona urbana) de la ciudad de
San Juan Bautistas, departamento de Misiones, Paraguay. Se realizó la visita de
aproximadamente 100 casas en búsqueda de garrapatas adultas cargadas de sangre,
asimismo se solicitó autorización de los propietarios de los caninos para el
muestreo. Una vez halladas las garrapatas se procedió a la identificación,
observando las características morfológicas que fueron compatibles con Rhipicephalus
sanguineus, el capítulo es hexagonal, escudo marrón o café, sin
ornamentaciones y con festones, palpos cortos (Álvarez, 2017), posteriormente
se realizó la extracción manual utilizando alcohol y algodón para evitar que
las garrapatas provoquen lesiones a los caninos, se depositaron en frascos
estériles identificados y enumerados cada uno. Las garrapatas fueron remitidas
al Laboratorio de Parasitología de la Facultad de Ciencias Veterinarias Filial
San Juan Bautista Misiones de la Universidad Nacional de Asunción.
En el laboratorio
se realizó el frotis de la hemolinfa de la garrapata utilizando Tinción Wright.
Con una pinza de mano se extrajo del frasco la garrapata cargada. Luego se
procedió a una pequeña inciso-punción con el bisturí en la parte
dorso-posterior de la garrapata y se dejó gotear una a dos gotas de hemolinfa
de garrapata en uno de los extremos del portaobjeto. Utilizando otro
portaobjeto se realiza el frotis de la hemolinfa de la garrapata, se procedió
al secado, dejando reposar de 1 a 3 minutos aproximadamente. Se colocó el
frotis secado sobre la rejilla o cubeta de tinción, se cubrió completamente el
portaobjeto con colorante Wright, se dejó reposar de 5-8 minutos, para fijar
los glóbulos sanguíneos. Luego se agregó directamente al colorante un volumen
igual de amortiguador Wright, para evitar la coloración débil y se dejó actuar
de 10-15 minutos, formándose el color metálico característico de la tinción.
Por último, se lavó con agua cuidadosamente hasta que la extensión presente un
aspecto rosado al examinarlo a simple vista, se dejó secar al aire y se observó
con el microscopio con el objetivo de inmersión (100x) (Rodak, 2004).
Los
resultados obtenidos fueron medidos por la siguiente fórmula
n= Total
de muestras x Muestras positivas
100
Se consideró como muestra
positiva a las muestras en donde se observó un par de merozoitos de Babesia
con forma piriforme teñidos de color azul y para Ehrlichia aquellas
muestras donde se observó cuerpos elementales teñidos de color oscuro o azul.
Resultados
y discusión
Tabla
1. Resultados
obtenidos del frotis de la hemolinfa de la garrapata de la especie Rhipicephalus
sanguineus.
|
Casos
|
|
N°
|
%
|
|
Muestras
|
Positivos
|
8
|
13
|
|
Negativos
|
54
|
87
|
|
Total
|
|
62
|
100
|
En la Tabla 1 se observa el total de Rickettsias
sp. y hemoparásitos detectados en las 62 muestras de garrapatas de la especie Rhipicephalus
sanguineus, 8 muestras que corresponden al 13% fueron
positivos a Rickettsias sp. y hemoparasitos, 54 muestras que corresponden
al 87% resultaron negativo a Rickettsias sp. y hemoparásitos por el
método de frotis de hemolinfa de la garrapata. Al igual que Castillo Martínez
et al. (2015) en México reportaron la presencia de Rickettsia sp. en una
frecuencia del 4% en órganos internos de la garrapata café del perro Rhipicephalus
sanguineus a través de técnicas moleculares.
Así
mismo, Domínguez Álvarez (2011) en Ecuador, utilizó 560 muestras sanguíneas de
los cuales 64 fueron positivos a hemoparásitos que corresponden al 11,43%
quedando 496 muestras negativos a hemoparásitos representando el 88,57%.
Mientras que, Mairena Leiva y Rojas Cano (2014) en Nicaragua, muestrearon 47
canes, según los datos que obtuvieron, el 36% fueron positivos a hemoparásitos
y 64% de los canes muestreados fueron negativos. Por otra parte, Meza Moreno y
Samarriba Aguirre (2014) también en Nicaragua, muestrearon 139 canes que dieron
como resultado el 5,8% de las muestras positivas, equivalente a 8 individuos.
También
Arenas et al., (2016) en Colombia, muestrearon 316 caninos de los cuales 139
resultaron infectados por hemoparásitos representando el 43,98% y 177 muestras
que representa al 56,01%, fueron negativos. Mientras que Giorgis et al.,
(2017) en Argentina, procesaron 409 muestras, de los extendidos sanguíneas
evidenciaron la presencia de hemoparásitos eritrocitarios y leucocitarios, la
prevalencia fue para ambos parásitos de 7,8% y 0,7% respectivamente. Rodríguez
et al., (2000) en México, analizaron 493 muestras sanguínea de caninos, de los
cuales 54 muestras que corresponde al 17,22% fueron diagnosticados positivos a hemoparásitos.
Los
resultados obtenidos con el frotis de la hemolinfa de la garrapata (Tabla 1),
no concuerdan con los investigadores citados, esto podría deberse a la cantidad
de garrapatas en el momento del muestro (aunque no sea un factor determinante),
la frecuencia de aparición de la enfermedad, el ciclo biológico de la
garrapata, también el método utilizado para la identificación de las Rickettsias
sp. y hemoparásitos. En comparación al trabajo de investigación realizado, el
método de diagnóstico utilizado por los investigadores fue de PCR, ELISA,
Inmunofluorescencia, como así también el material
biológico (sangre) que utilizaron para el diagnóstico. Estos y otros factores podrían
deberse a la diferencia de los resultados obtenidos.
Con
respecto a los animales cuyas garrapatas dieron positivos a Rickettsias
sp. y hemoparasitos, 4 caninos que representa al 50% fueron macho, mientras que
4 caninos fueron hembra que representa al 50%. En cuanto a los resultados de
muestras sanguíneas positivos a hemoparasitos, Domínguez Álvarez (2011) en Ecuador
demostró que el 64,06% corresponde a caninos machos que representa a 41
muestras y el 35,94% corresponde a caninos hembras que representa a 23
muestras. Arenas et al. (2016) reportaron en Colombia, de los 316 animales
muestreados, 131 correspondieron a hembra (42%) y 185 a macho (58%). Mientras que Meza Moreno y Somarriba Aguirre (2014)
determinaron en Nicaragua, que la proporción de hembra-macho de las muestras
fueron las siguientes, macho 70,5% y hembra 29,5%. Mairena Leiva y Rojas Cano
(2014) en Nicaragua, no discriminaron en la investigación el sexo de los
animales con resultado positivo, al igual que Rodríguez et al., (2000) en
México y Giorgis et al., (2017) en Argentina.
Nuestros
hallazgos en cuanto al rango etario de los caninos cuyas garrapatas fueron
positivos a Rickettsias sp. y hemoparasitos fueron del 25% caninos
menores de 1 año, el 50% tenían entre 1 y 5 años, y 25% caninos mayores de 5
años, estos datos no coinciden con Domínguez Álvarez (2011) en Ecuador, que el
17,19% correspondieron a caninos menores de 1 año, el 60,94% entre 1 y 5 años y
21,88% mayores de 5 años. Con
relación a la raza los hallazgos mostro que el 37,5% eran de raza pura y el
62,5% eran de raza mestizo, sin embargo; Domínguez Álvarez (2011) en Ecuador se
mostró diferentes a nuestros resultados, siendo el 82,81% de los caninos de
raza pura mientras el 17,19% de raza mestizo.
Siguiendo
con relación al rango etario y la raza de los caninos, en comparación a
nuestros hallazgos; Arenas et al. (2016) en Colombia, dividieron en 3 grupos
etarios, el 62% caninos de entre 12 y 84 meses, 22% caninos seniles y 16%
cachorros menores de 12 meses. De forma similar Meza Moreno y Somarriba Aguirre
(2014) en Nicaragua diagnosticaron 75% de ehrlichiosis en caninos entre 13 – 60
meses de edad y 25% en mayores de 61 meses. Así mismo, Giorgis et al., (2017)
en Argentina clasifico a los caninos en cachorros (menores de 1 año), jóvenes
(1 a 5 años), adultos (5 a 10 años) y viejos (mayores a 10 años). Por otra
parte, Mairena Leiva y Rojas Cano (2014) en Nicaragua, muestrearon caninos al
azar mayores de 4 meses de edad. Con relación a la raza, Arenas et al. (2016)
en Colombia, Rodríguez et al., (2000) en México, Giorgis et al. (2017) en
Argentina, Mairena Leiva y Rojas Cano (2014) en Nicaragua, Meza Moreno y
Somarriba Aguirre (2014) también en Nicaragua no realizaron la discriminación en
cuanto a la raza en las investigaciones.
Se puede considerar que la
edad, raza y sexo no son factores determinantes para la aparición de estas
enfermedades, la presencia de garrapatas en los caninos no es un indicador de
la enfermedad. Si bien los caninos cuyas garrapatas dieron positivos a Rickettsias
sp. y hemoparasitos se encontraban en buen estado corporal y en hogares
limpios, pero con vegetaciones en los alrededores.
Figura
1. Porcentaje de Rickettsias
sp. y hemoparásitos en garrapatas de la especie Rhipicephalus sanguineus
sobre el total de muestras, n= 62.
En la Figura
1 se especifica que, del total de 62 garrapatas muestreadas, 4 muestras que
corresponden al 6,5% se observó cuerpos elementales de Ehrlichia spp. (Figura
2), otras 4 muestras que corresponden al 6,5% pertenecen a cuerpos vermiformes
de Babesia spp. (Figura 3). El 87 % resultaron negativo que corresponden
a 54 garrapatas de la especie Rhipicephalus sanguineus.
Con
respecto a los resultados hallados en la investigación, concuerdan parcialmente
con los de Cicuttin et al. (2014) en Argentina que estudiaron 56 muestras
sanguíneas de caninos, 75 garrapatas de la especie Rhipicephalus sanguineus
y 7 Amblyomma tigrinum. Detectaron positividad a Rickettsia en
12% en Rhipicephalus sanguineus, identificando por secuenciación a Rickettsia
massiliae, en cuanto a las muestras sanguíneas de los caninos resultaron
37,5% positivos a Anaplasma platys. Con relaciona a nuestros hallazgos,
concuerdan parcialmente con Ábrego Sánchez (2008) en Costa Rica que identificó
160 garrapatas de las especies Rhipicephalus sanguineus, 4 Amblyoma
ovale y 1 Ixodes boliviensis, al mismo tiempo identifico por PCR en
43 garrapatas de la especie Rhipicephalus sanguineus Ehrlichia canis
y en 5 garrapatas Anaplasma platys, dos garrapatas presentaron
infecciones mixtas con Ehrlichia canis y Anaplasma platys, una
garrapata positiva para cada uno de estos agentes fue secuenciada encontrando
una similitud de 99% para Ehrlichia canis y de 98% para Anaplasma
platys.
En
cuanto a los resultados obtenidos en la presente investigación no concuerdan
con otros investigadores quienes hallaron Rickettsias sp. y hemoparasitos
en sangre de caninos, como por ejemploDomínguez
Álvarez (2011) en Ecuador, quien identifico 56,25% de Ehrlichia canis,
3,13% de Anaplasma phagocytophilum, estos en forma de mórula,
mientras que 40,63% de Babesia canis, merozoitos en forma
piriforme. Castillo Martínez et al. (2015) en México, identificaron Rickettsia
sp. en caninos dando como resultado 4%; Huerto Medina y Dámaso Mata (2015) en Perú
recolectaron muestras de sangre de 150 perros infestados con garrapatas,
detectaron anticuerpos contra Ehrlichia canis mediante inmunoensayo
cromatográfico. El 51,3% de perros estuvieron infectados por Ehrlichia canis.
Así
mismo, Arenas et al. (2016) en Colombia determinaron la prevalencia de Ehrlichia
canis, Anaplasma platys y Babesia spp, la mayor frecuencia de
infectados correspondió a Ehrlichia canis (39,2%), seguido de Anaplasma
platys (3%) y Babesia spp (2%). Mientras que Mairena Leiva y Rojas
Cano (2014) en Nicaragua determinaron la prevalencia de 32% para Haemobatonella
canis siguiendo una asociación de Ehrlichia de 4%. También Meza
Moreno y Somarriba Aguirre (2014) en Nicaragua obtuvieron una prevalencia de
ehrlichiosis canina de 5,8%. Sin embargo, Rodríguez et al., (2000) en México
presento la frecuencia de hemoparasitos diagnosticados en 493 muestras
sanguíneas de canino, Dirofilaria immitis (7,42%), Dipetalonena
reconditum (5,88%) y Babesia canis (3,92%).
Figura 2. Cuerpos elementales de Ehrlichia
spp. en frotis de hemolinfa de garrapata con tinción Wright en aumento
de 100x.
Figura 3. Cuerpos vermiformes de Babesia spp.
en frotis de hemolinfa de garrapata con tinción Wright en aumento de 100x.
Conclusión
Se
identificó los hemoparásitos y la Rickettsia sp. en frotis de hemolinfa
de garrapatas de caninos por el método de tinción Wright. El Rhipicephalus
sanguineus es la garrapata marrón del perro más común en la zona afectando
a la mayoría de la población canina. Teniendo en cuenta los datos obtenidos se
puede corroborar que la edad, raza y sexo de los caninos y la presencia de
garrapatas por el canino no es un indicador que afirme la presencia de algunas
enfermedades trasmitidas por estos artrópodos.
La
temperatura juega un papel importante en la proliferación de las garrapatas,
pero tampoco es un factor determinante ya que tanto en temporadas frías como
cálidas las garrapatas siguen estando presentes.
Se recomienda continuar con
el trabajo de investigación utilizando otros métodos de diagnósticos de mayor
sensibilidad, aumentar el tamaño de muestra para colaborar con las
investigaciones y de esta forma aportar información a instituciones afines y a
la comunidad. Informar a la comunidad sobre la importancia del control de
ectoparásitos para evitar la trasmisión de enfermedades, como así también a los
propietarios de las mascotas sobre los factores de riesgo, para que puedan
tomar las medidas necesarias para controlar y así disminuir la exposición de
sus mascotas a los agentes.
Fuente
de Financiamiento
Sin financiamiento externo.
Contribución
de autores
Concepción del estudio: C.A.A.M., M.C.A.R., L.L.T.A. Diseño del experimento: C.A.A.M., L.L.T.A., M.C.A.R. Ejecución del experimento: C.A.A.M., M.C.A.R., L.L.T.A. Verificación
del experimento: C.A.A.M.,
M.C.A.R., L.L.T.A. Análisis/interpretación de datos: C.A.A.M., M.C.A.R., L.L.T.A. Análisis estadísticos: C.A.A.M., M.C.A.R., L.L.T.A. Preparación
del manuscrito: C.A.A.M.,
M.C.A.R., L.L.T.A. Edición y revisión del manuscrito: M.C.A.R., L.L.T.A. Aprobación
de la versión final del manuscrito: M.C.A.R.,
L.L.T.A.
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